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HPLC溶劑乙腈和甲醇的關(guān)鍵區(qū)別和性能
乙腈(ACN)和甲醇(MeOH)是在反向色譜柱方法開發(fā)中廣泛使用的兩種常見溶劑。所以，除了知道乙腈比甲醇有更高的洗脫能力這一事實(shí)外，還有一些其他特性。
首先，對流動(dòng)相溶液的準(zhǔn)備提出幾點(diǎn)意見。
只有純水溶液部分才能正確調(diào)整pH值。不要嘗試測量或調(diào)整有機(jī)或有機(jī)混合物的pH值。
制備二元混合物的方法有兩種，即V/V流動(dòng)相溶液。
方法#1是用特定體積的“A”溶液填充一個(gè)量瓶，然后用“B”溶液將量瓶填滿。
方法#2是用數(shù)量的“A”溶液填充量筒(或容量瓶);用數(shù)量的“B”溶液填充第二個(gè)量筒(或容量瓶)，然后將兩者的內(nèi)容混合在一起。
無論您使用哪種方法，請?jiān)谀囊合嗌V法中完整地記錄它，以便任何閱讀它的人都能準(zhǔn)確地復(fù)制它。上面描述的兩種方法在設(shè)計(jì)上都是正確的，但是會產(chǎn)生不同性質(zhì)的結(jié)果。
紫外線吸光度
對于HPLC級溶劑(*我們在HPLC分析中應(yīng)始終使用HPLC級溶液)，乙腈的吸光度(~ 190nm)在這兩種溶劑中低，非常適合低紫外光分析。甲醇在205-210nm左右有較高的紫外光截止值，在非常低的紫外光范圍內(nèi)略有限制。
溶劑溶解性
乙腈和甲醇在溶解多種緩沖鹽和樣品的能力上存在顯著差異。這些差異在方法開發(fā)中至關(guān)重要。
流動(dòng)相溶解度
梯度運(yùn)行顯示低重現(xiàn)性或失敗的一個(gè)常見原因可能與運(yùn)行高濃度緩沖液和高濃度有機(jī)溶液有關(guān)。而含有濃度小于10mM鹽溶液的水溶液/有機(jī)溶液在大多數(shù)梯度條件下不太可能沉淀(多98%是有機(jī)溶劑，而不是100%)，大多數(shù)與液相色譜應(yīng)用一起使用的緩沖溶液會有更高的鹽濃度，當(dāng)分析條件中有機(jī)溶劑含量較高時(shí)可能會從溶液中析出(導(dǎo)致堵塞，泄漏，插頭和不準(zhǔn)確的結(jié)果)。在反向色譜法中選擇有機(jī)組成時(shí)要謹(jǐn)慎。確保使用的溶液在所有濃度下都是穩(wěn)定的。還要驗(yàn)證緩沖能力是否仍然存在，當(dāng)使用高有機(jī)濃度時(shí)(當(dāng)緩沖液被稀釋時(shí))。
不確定鹽是否會溶解?只要把同樣濃度的溶劑混合起來做測試就行了。觀察它，有任何渾濁或可見顆粒嗎?你就可以得到你需要的答案。
甲醇總體上具有更好的溶解度特性(優(yōu)于乙腈)，這意味著它在較高濃度下能更好地溶解大多數(shù)鹽(尤其是NH4, K和Na)，從而獲得更好的性能和更少的沉淀。
樣品的溶解度(對峰形和保留的影響)
液相色譜的一個(gè)基本要求是樣品*溶解在流動(dòng)相(初始流動(dòng)相)中。在分析前，將樣品溶解在流動(dòng)相或強(qiáng)度稍弱的溶液(不是更強(qiáng)的溶液)。這確保它將作為一個(gè)集中的段塞加載到柱的頂部，以改善峰形和RSD。如果樣品沒有*溶解在流動(dòng)相，那么你實(shí)際上并沒有分析整個(gè)樣品。甲醇優(yōu)于乙腈的另一個(gè)方面是它能*溶解更多類型的樣品。這一改進(jìn)的溶解度可能導(dǎo)致更好的整體峰形。甲醇的選擇性也不同于乙腈(不僅僅是洗脫強(qiáng)度)，這可能導(dǎo)致峰洗脫時(shí)間與預(yù)期的保留時(shí)間不同。這也是為什么在開發(fā)反向方法時(shí)，我們總是嘗試使用含有乙腈或甲醇的不同流動(dòng)相混合物的另一個(gè)原因。
永遠(yuǎn)不要假設(shè)一種溶劑會比另一種溶劑更好。太多的色譜新手只使用乙腈作為他們方法開發(fā)的主要有機(jī)溶劑。請不要犯他們的錯(cuò)誤，這樣的策略表明缺乏實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和知識。您必須首先分別嘗試它們(乙腈&甲醇)用你的樣品來評估結(jié)果(在適用的情況下從不同pH值的全面梯度開始)。如果您在初的時(shí)間內(nèi)測試了這兩種類型的溶劑，那么您將獲得回報(bào)，因?yàn)檫€沒有開發(fā)出能夠使用您自己的樣品來預(yù)測真正準(zhǔn)確的結(jié)果的模擬器。您可能會驚訝地發(fā)現(xiàn)，有多少樣品使用甲醇溶液顯示出更好的峰形和性能。如果沒有看到任何改善，至少你現(xiàn)在知道了，因?yàn)槟阋呀?jīng)嘗試過了，并且可以滿懷信心地前進(jìn)。
背壓
乙腈的粘性比甲醇小，因此通常會導(dǎo)致整體柱壓和系統(tǒng)背壓降低。乙腈和水的混合物也會發(fā)生吸熱反應(yīng)(冷卻溶液)，從而在溶液中捕獲氣體。如果你預(yù)先混合你的流動(dòng)相，讓它靜置幾分鐘后在制備。
甲醇比乙腈更粘稠。它還有一個(gè)不尋常的特性，就是甲醇和水的50/50混合物會產(chǎn)生一個(gè)比甲醇或水更高的系統(tǒng)和柱背壓。其效果是非常高斯的，它的峰值壓力是由50/50的混合物所觀察到的。兩種溶液在開始混合釋放出一些氣體也會產(chǎn)生放熱反應(yīng)。在制備溶液時(shí)，是讓溶液靜置幾分鐘，然后在高壓液相色譜系統(tǒng)中使用。
希望這篇關(guān)于這兩種常用液相色譜溶劑的差異的簡短討論將有助于您開發(fā)出更好的液相色譜和LC-MS方法。
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