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1.適用范圍
本方法適用于出口茶葉中Aflatoxin B1含量的檢驗。
2.原理概要
樣品用CHCl3提取，提取液經(jīng)硅膠柱凈化，凈化后的提取液用三C2HF3O2衍生，用配有熒光檢測器的液相色譜儀測定，外標法定量。
3.主要試劑和儀器
3.1.主要試劑：CHCl3、正己烷、苯、甲醇：紫外光譜級、乙腈：紫外光譜級、三C2HF3O2、乙腈-水溶液(1+1)、CHCl3-甲醇溶液(95+5)、苯-乙腈溶液(98+2)、Aflatoxin B1標準品：純度≥99%、Aflatoxin B1標準溶液：準確稱取適量的Aflatoxin B1標準品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成濃度為10μg/mL標準貯備液。根據(jù)需要，再配成適當濃度的標準工作溶液。
3.2.儀器
液相色譜儀，配有熒光檢測器;
硅膠小柱：Sep-pak Silica前處理小柱或相當?shù)墓枘z前處理小柱;
振蕩器;
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，配有100mL具尾管的圓底燒瓶;
微量注射器;
離心管：5mL具塞磨口;
粉碎機;
濾膜：有機系用，0.45μm;
微孔濾膜過濾器：有機系用，0.5μm。
4.試樣的抽取與制備
4.1.檢驗批
以不超過2000件為一檢驗批。
同一檢驗批的商品應具有相同的特征，如包裝、標記、產(chǎn)地、規(guī)格、等級等。
4.2.抽樣數(shù)量
批量，件 低抽樣數(shù)，件
1～5 1
6～50 2
51～500 11
501～1000 16
1001～1500 19
1501～2000 20
4.3.抽樣方法
從整批產(chǎn)品堆垛的上下不同部位隨機抽取2.2規(guī)定的件數(shù)，逐件開啟。分別倒出全部茶葉于塑料布上，用取樣鏟從每件中各取出有代表性的樣品約500g。將所取樣品充分混勻，用四分法或分樣器逐步縮分出500g，裝入潔凈密封的樣品筒內(nèi)，加封后，標明標記，及時送實驗室。
4.4.試樣制備
將所取回樣品全部磨碎，通過20目篩，混勻，均分成兩份試樣，裝入潔凈容器內(nèi)，密封，標明標記。
4.5.試樣保存
將試樣于室溫下保存。
注：在抽樣和制樣的操作過程中，必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。
5.過程簡述
5.1.提取
稱取試樣5.0g(到0.1g)置于100mL具塞錐形燒瓶中，加入15mLCHCl3，于振蕩器上提取30min，然后經(jīng)墊有玻璃纖維的漏斗過濾。收集濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的具尾管圓底燒瓶內(nèi)，并用CHCl3洗滌濾渣，收集濾液至約20mL。
5.2.凈化
用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將上述濾液在50℃水浴中濃縮至約1mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，注入硅膠小柱中。用2～4mL正己烷洗滌燒瓶后淋洗小柱，棄去流出液。然后用3～4mLCHCl3-甲醇溶液以每秒鐘2滴的流速洗脫，收集洗脫液于離心管中。用氮氣緩緩吹干，供衍生用。
5.3.衍生
5.3.1.試樣
加200μL正己烷和50μL三C2HF3O2于上述離心管中，蓋緊磨口塞，超聲振蕩1min，靜置10min，打開磨口塞，緩緩通入氮氣至干。用乙腈-水溶液(1+1)定容至1.0mL，超聲1min，用0.5μm濾膜過濾，濾液供液相色譜用。
5.3.2.標準工作溶液
取1.0mL標準工作溶液，用氮氣緩緩吹干，按5.3.1步驟操作。
5.4.測定
5.4.1.色譜條件
色譜柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm(內(nèi)徑);
流動相：甲醇-水溶液(42+58);
流速：0.8mL/min;
熒光檢測器：激發(fā)波長375 nm，發(fā)射波長425 nm;
色譜柱溫度：室溫。
5.4.2.測定
根據(jù)樣液中Aflatoxin B1的含量情況，選定峰高相近的標準工作溶液。標準工作溶液和樣液中Aflatoxin B1衍生物的響應值均應在儀器檢測線性范圍內(nèi)。對標準工作溶液和樣液的衍生物溶液等體積參**樣測定。在上述色譜條件下，Aflatoxin B1衍生物保留時間約為8min。
5.4.3.空白試驗
除不加試樣外，按上述測定步驟進行。
6.結(jié)果計算
用色譜數(shù)據(jù)處理機或按下式計算試樣中Aflatoxin B1的含量：
X= A·cs
As·c
式中：X -- 試樣中Aflatoxin B1的含量，mg/kg;
A -- 樣液中Aflatoxin B1衍生物的峰面積，mm2;
cs -- 標準工作溶液中AflatoxinB1的濃度，μg/mL;
As -- 標準工作溶液中AflatoxinB1衍生物的峰面積，mm2;
c -- 終樣液所代表試樣的濃度，g/mL。
注：計算結(jié)果需扣除空白值。
7.低限和回收率測定
7.1.低限
本方法的測定低限為0.001mg/kg。
7.2.回收率
回收率的實驗數(shù)據(jù)：Aflatoxin B1的添加濃度在0.001～0.5mg/kg范圍內(nèi)，回收率為89.1%～104.9%。
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4006091615
